欧美国产亚洲中英文字幕,国产欧美在线一区二区三区,亚洲 欧洲 无码 在线观看,三级午夜理伦三级

銷售熱線

19126518388

  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > 制備YAC DNA進(jìn)行Southern印跡分析

    制備YAC DNA進(jìn)行Southern印跡分析

    發(fā)布時(shí)間： 2021-12-24　　點(diǎn)擊次數(shù)： 819次

    材料與儀器

    酵母菌
    AHC SCE SCEM Tris·Cl EDTA TE 乙酸甲 RNase A 異丙醇 NaCl
    培養(yǎng)箱 離心管 轉(zhuǎn)子

    步驟


    1.  接種一個(gè)紅色的含YAC克隆的酵母菌落于盛有20 ml AHC培養(yǎng)基的250 ml 三角燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)搖床上30℃ 250 r/min 振蕩培養(yǎng)24 h。
     
    2.  擴(kuò)大培養(yǎng)：取1ml 由步驟1獲得的粉紅色菌懸液接種于盛有100 ml AHC培養(yǎng)基的 1 000 ml三角燒瓶中，于30℃ 250 r/min搖床培養(yǎng)24 h。

    3.  將菌懸液移入2個(gè)50 ml 的錐形離心管中，于2 000 g 離心5 min，棄上清，共用5 ml SCE緩沖液重懸菌體，并合并到一個(gè)試管中。

    4.  加1 ml SCEM緩沖液，在旋轉(zhuǎn)搖床中37℃ 100 r/min 輕搖晃混勻。

    5.  于4℃ 2 000 g 離心棄上清，菌體用5 ml Tris/EDTA裂解液重懸。

    6.  加0.5 ml 10%SDS顛倒混合數(shù)次，于65℃溫育20 min。
     
    7.  加2 ml 冰浴的5 mol/l pH4.8的乙酸甲緩沖液，顛倒混合數(shù)次后置于冰浴60 min。

    8.  于室溫2 000 g 離心10 min，小心將含核酸的上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新管中。加室溫2倍體積的95%乙醇，顛倒混勻。

    9.  于室溫2 000 g 離心5 min，棄上清，在室溫晾干10~15 min，分別加入3 ml TE緩沖液，pH8.0于37℃過夜溶解核酸。

    10.  加入0.1 ml 的1 mg/ml 無DNA酶活性的RNase A，于37℃溫育1 h。
     
    11.  加入6 ml 室溫的異丙醇，振蕩并顛倒混勻后用一支毛細(xì)管纏繞起染色體，然后溶于0.5 ml TE緩沖液中。

    12.  加入50 μl 5 mol/l NaCl和2 ml 95%乙醇，顛倒混勻。

    13.  再一次纏繞起染色體DNA，并溶于0.5 ml TE緩沖液中，于4℃保存?zhèn)溆谩?/div> 
    14.  取毎小份2 μg 的YAC DNA和15 μg 用以構(gòu)建YAC文庫的某物種或個(gè)體的基因組DNA。

    15.  采用幾種高頻切割的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，接著用單拷貝探針進(jìn)行雜交和核酸印跡分析。
     
    16.   一旦通過核酸印跡實(shí)驗(yàn)確證YAC克隆，那么可通過制備染色體凝膠校塊塞和進(jìn)行脈沖電場凝膠電泳，來明確重組YAC的大小并對其穩(wěn)定性進(jìn)行初步評價(jià)。


    同實(shí)驗(yàn)其他方法

    YAC 克隆的分析實(shí)驗(yàn)

    1.  用接種棒將含重組載體pYAC的AB1380菌株劃線接種在AHC平板上，倒扣平板于30℃培養(yǎng)，直至長出1~3 mm 大小的紅色菌落為止。 2.  短期保存：用Parafilm膜將平

    以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。


    安培生物科技有限公司介紹：

    安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。


產(chǎn)品中心 Products
国产精品vr无码专区| 美女被免费视频网站a国产| 国产精品毛片无码| 成人香蕉视频在线看| 久久偷看各类WC女厕嘘嘘| 国产精品乱码一区二区三区| 欧美日韩电影免费观看| 99久久亚洲综合网精品| 日韩亚洲中文字幕在线| 精品亚洲免费观看网| 伊人大杳蕉在线影院75| 精品国产日韩一区二区三区| 18禁黄久久久AAA片广濑美月| 老师的兔子好软水好多车视频| 国产丝袜美女一区二区三区| 亚洲尤码不卡AV麻豆| 精品久久成人免费第三区| 日本日本乱码伦视频在线观看| 国产亚洲欧美一区久久久在| 亚洲午夜无码久久久久小说| 日本邪恶在线看片| 色一情一乱一伦一区二区三区日本| 久久久久久久久精品国产| 国内精品久久久久久久影院| 亚洲国产成人无码网站大全| 国产精品久久久久久五月尺| 欧美日韩在线成综合| 精品视频在线观看一区二区三区| 男人J进女人P免费视频| 婷婷五月日韩AV永久免费| 美女乱子伦高潮在线观看完整片| av男人天堂网| 被陌生人公开羞耻调教| 欧美激情一区二区三区在线播放| avwww在线| 久久热这里只有精品99| 91日本三级视频| 少妇AV一区二区三区无码| A级毛片高清免费视频就| 国产乱妇乱子在线播放视频| 最新国产精品好看的精品|